在测量时分光光度计应注意事项

  吸收光谱测量的基础——比耳朗伯定律，与吸收测量有关的误差源，以及测量过程中的注意事项。

一、 吸收度测量的误差源
     将吸收度的测量误差分为两在类考虑为宜。第一种误差源于光谱光度计；第二种误差直接或间接地与光度光度计的使用有关。实际上这两种误差是很难截然分开的。
 
1． 反射损失
     如果试样和参比皿的质量很高，则外表的损失 可以忽略；在液体与熔融石英的界面上，反射损失也可忽略，因为在紫外吸收光谱测量中，溶质的浓度是非常低的。在充水的熔融石英皿中的内反射损失，对于589.3nm波点仅占入射通量的0.4%。资料来源：http://color.hjunkel.com

2． 散射损失
    在混浊试样中，细小的不导电粒子会显示出廷德尔（Tyndall）散射现象，其强度正比于频率的四次方。这会产生非常严重的问题，特别在短波区明显地偏离比耳-朗伯定律。有经验的测试人员应设法克服这种误差

3．  分光光度计的局限性
     必须区分透射比或吸收度这两个量的工作定义与真实透射比或真实吸收度之间的差异。

二、 比耳朗伯定律
     在光谱光度法中有一个重要的情况，除了规则透射能量фr以外,通过试样之后不产生其它通量,而且吸收体是由无联系的原子或分子组成的.在这种情况下,透射能量与试样的某些通量参数之间存在一个非常重要关系式,这就是著名的比耳朗伯(Beer-;a,bert)定律。在应用这一定律时，必须已知试样的参数，即光束通过试样的光程长（对于固体试样，即试样厚度），吸收体的浓度或摩尔吸收率。
     当吸收体是无相互作用的原子或分子时，比耳朗伯定律是有效的，这一条件仅仅适用于低压下的理想气体。实际上，比耳朗伯定律是可以成功的应用于浓度范围相对大的稀释溶液。在高浓度时，吸收体开始形成聚合物，从而引起摩尔吸收率的变化。比耳朗伯定律适用性的另一条件是，除了能量фr以外，其它通量为零。对准理想溶液这一条件是容易满足的，但当试样出现荧光或出现光学混浊时就不能完全满足。有一些物质明显偏离比耳朗伯定律，这往往是不良的实验过程或试样条件控制不好造成的。

    吸收光谱测量发源于分析化学。利用不同的物质具有不同的吸收峰的特性，通过吸收光谱测量可以作物质的杨分分析；利用一定条件下溶液的浓度与其吸收度的依赖关系，通过吸收光谱测量可以作物质的含量分析。由此看来，作为吸收光谱测量基本仪器——分光光度计乃是分析化学的重要手段之一。如1.1所述，试样的吸收度是通过内透射比计算的，而透射比是光辐射测量中的物理量之一，所以，就其本质而言，吸收光谱测量的主要量乃是光学辐射量。分光光度计从它诞生日起，除了测量溶液之外，也测量诸如玻璃、晶体这类的固体材料，随着现代工业的发展，固体试样越来越多。国内外从事光辐射计量的实验室先后发展基准分光光度计，复现光谱透射（吸收度）标，并开展室际之间的量值对。

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